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主營(yíng)產(chǎn)品:主要技術(shù)服務(wù):細(xì)胞STR鑒定;支原體檢測(cè);細(xì)胞種屬檢測(cè);端粒長(zhǎng)度檢測(cè);端粒酶活性檢測(cè)等。
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    生物制藥領(lǐng)域支原體檢測(cè)的主流方法

    發(fā)布時(shí)間: 2025-07-01  點(diǎn)擊次數(shù): 63次

    生物制藥領(lǐng)域支原體檢測(cè)的主流方法

    在生物制藥領(lǐng)域,支原體污染可能影響產(chǎn)品安全性和有效性,因此檢測(cè)方法需具備高靈敏度、特異性和可靠性。目前該領(lǐng)域支原體檢測(cè)的主流方法如下:

     

    一、核酸擴(kuò)增NAT-PCR )

    原理:通過(guò)設(shè)計(jì)針對(duì)支原體保守基因的特異性引物,利用 PCR 或?qū)崟r(shí)熒光定量 PCR(qPCR)技術(shù)擴(kuò)增樣本中的支原體核酸,通過(guò)熒光信號(hào)或電泳結(jié)果判斷是否存在污染。
    特點(diǎn)(qPCR法

    靈敏度高配合抽提方案,可檢測(cè)低至 101 CFU/mL 的支原體。

    速度快2-4 小時(shí)內(nèi)可出結(jié)果,優(yōu)于傳統(tǒng)培養(yǎng)法。

    特異性強(qiáng):引物針對(duì)支原體序列,減少其他微生物干擾。

    適用范圍廣:可檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清、發(fā)酵液、純化產(chǎn)物等多種樣本類型。
    應(yīng)用場(chǎng)景:生物制藥生產(chǎn)過(guò)程中的中間產(chǎn)物,以及細(xì)胞庫(kù)、培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控。

    二、支原體培養(yǎng)法(經(jīng)典金標(biāo)準(zhǔn))

    原理:將樣本接種于含血清、酵母提取物等營(yíng)養(yǎng)成分的特殊培養(yǎng)基(如 Hayflick 培養(yǎng)基、PPLO 培養(yǎng)基)中,在適宜溫度(35-37℃)和氣體環(huán)境下培養(yǎng),觀察是否出現(xiàn)典型的 “油煎蛋" 狀菌落。
    特點(diǎn)

    準(zhǔn)確性高:可直接培養(yǎng)并鑒定活支原體,是藥典(如《中國(guó)藥典》3301 支原體檢查法)規(guī)定的參考方法。

    可進(jìn)行藥敏試驗(yàn):若培養(yǎng)陽(yáng)性,可進(jìn)一步測(cè)試抗生素敏感性,指導(dǎo)污染處理。

    缺點(diǎn):培養(yǎng)周期長(zhǎng)(需 21 天以上),操作復(fù)雜,對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和技術(shù)要求高。
    應(yīng)用場(chǎng)景:用于法規(guī)要求的最終產(chǎn)品放行檢測(cè)。

    三、指示細(xì)胞法

    原理:是一種通過(guò)觀察特定細(xì)胞(指示細(xì)胞)在支原體污染后的形態(tài)或功能變化,來(lái)間接檢測(cè)支原體的方法。

    特點(diǎn):

    直觀性:通過(guò)細(xì)胞形態(tài)或代謝變化直接反映支原體感染,無(wú)需復(fù)雜儀器,適合基層實(shí)驗(yàn)室。

    模擬生理環(huán)境:指示細(xì)胞與支原體的相互作用更接近實(shí)際感染場(chǎng)景,可檢測(cè)部分難以用核酸或培養(yǎng)法發(fā)現(xiàn)的苛養(yǎng)型支原體。

    缺點(diǎn)需較高濃度的支原體(10?-10? CFU/mL)才能觀察到明顯變化,易漏檢早期或低水平污染;耗時(shí)較長(zhǎng),共培養(yǎng)需 3-7 天;特異性差,結(jié)果判斷易受人為因素影響

    應(yīng)用場(chǎng)景初步篩查,在缺乏 PCR 設(shè)備的實(shí)驗(yàn)室中,作為支原體污染的初篩手段,尤其是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的日常監(jiān)控。

     

    幾種方法的對(duì)比

    檢測(cè)方法

    靈敏度

    檢測(cè)時(shí)間

    特異性

    操作復(fù)雜度

    法規(guī)符合性

    指示細(xì)胞法

    3-7 天

    非藥典主流方法

    培養(yǎng)法

    21 天以上

    藥典金標(biāo)準(zhǔn)

    核酸擴(kuò)增法(qPCR 法)

    2-4 小時(shí)

    藥典可選:經(jīng)過(guò)驗(yàn)證后,可以選用